期刊简介
中华医学会、中国医学科学院生物医学工程所主办。本刊专门报导国内外生物医学工程学科领域的新技术、新进展、新动向与新成果，促进国际生物医学工程学科的学术交流。本刊不仅全面、及时地介绍和跟踪了国际生物医学工程的研究进展与趋势，也反映了我国生物医学工程学科的研究动向和关注热点。读者对象是生物医学工程科研工作者、医生和临床工程人员、高等院校有关专业师生及研究生等。主要栏目设有专家论坛、综述、论著、研究简报、新技术介绍及消息等。本刊为中文核心期刊(北京大学图书馆)及中国科技论文统计源期刊(中国科技核心期刊)。
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首页>国际生物医学工程杂志
- 杂志名称：国际生物医学工程杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中华医学会;中国医学科学院生物医学工程研究所
- 国际刊号：1673-4181
- 国内刊号：12-1382/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：在首届《CAJ－CD规范》执行评优活动中荣获《CAJ－CD规范》执行优秀奖期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
抗程序性死亡受体-1纳米抗体的制备及鉴定
范利华；马晓玲；李江伟
关键词：程序性死亡受体-1, 纳米抗体, 重链抗体可变区, 鉴定, 噬菌体展示
摘要：目的 制备能与程序性死亡受体-1(PD-1)抗原高亲和力结合的骆驼源纳米抗体,为后续开展其功能性研究提供实验基础.方法 采用真核表达的PD-1-Fc重组蛋白对新疆双峰驼进行6次免疫,采集其外周血并从中分离得到淋巴细胞,进行巢式PCR扩增获取骆驼重链抗体可变区(VHH)基因,并构建噬菌体展示文库.然后采用固相酶联免疫吸附测定(ELISA)法筛选噬菌体展示文库,包被质量浓度依次降低(5.00、2.50、1.00 μg/ml)的PD-1抗原于ELISA板中,对噬菌体展示文库进行3轮亲和淘选.接着采用可溶性单克隆ELISA法进一步筛选与PD-1结合的单个克隆.根据DNA测序结果挑选具有多次重复序列的3个VHH单克隆构建至pET22b载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞后采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导表达.后采用镍柱亲和层析纯化重组VHH抗体蛋白,蛋白质印迹法(Western Blot)和ELISA法检测其与PD-1抗原的结合活性和亲和力.结果 采用重组蛋白PD-1-Fc对双峰驼免疫6次后,激发了高滴度的特异抗体,免疫血清效价达到1∶32 000.从免疫后的骆驼淋巴细胞构建了库容大小为2.6× 108 cfu/ml的VHH噬菌体展示文库.经3轮亲和筛选后,采用可溶性单克隆ELISA法进一步筛选获得46个吸光度(A600)值在0.6以上的单个VHH克隆.其中VHH-B7、VHH-H5和VHH-H12三个克隆序列具有较高重复,表明获得了显著富集.Western Blot及ELISA法检测结果显示,纯化的B7、H5和H12纳米抗体均与PD-1抗原具有较好的结合活性,且具有较高的亲和力,亲和力常数分别为1.19×1011、1.63×1011、1.59×1011 L/mol.结论 通过对VHH噬菌体展示文库进行亲和筛选,获得了能与PD-1抗原高亲和力结合的抗PD-1骆驼源纳米抗体,为后续开展其功能性研究提供了实验基础.
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